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技術(shù)文章

超濾離心管的正確使用方法

更新時(shí)間:2025-10-21 瀏覽次數(shù):339

一、使用前準(zhǔn)備

  1. 選型適配


    根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量選截留分子量(MWCO)合適的超濾管,通常不超過目標(biāo)蛋白分子量的1/3,如35kDa蛋白可選10kDa截留量超濾管。同時(shí),確認(rèn)超濾膜材質(zhì)與樣本化學(xué)性質(zhì)兼容,按樣本體積選容量規(guī)格,確保液面不超管頂標(biāo)識線。

  2. 預(yù)處理


    新超濾管可能含保護(hù)劑,需用純水或緩沖液浸泡后離心(1000×g,1分鐘)去除殘留。將其置于4℃冰箱預(yù)冷10分鐘,再放冰上預(yù)冷2 - 5分鐘,防膜變形或蛋白變性。若不立即使用,用20%乙醇浸泡,保持膜濕潤,避免干裂長菌。

二、操作流程

  1. 加樣與平衡


    倒置離心去除殘留水后,輕柔加樣本,避免劇烈晃動。將超濾管對稱放入離心機(jī)轉(zhuǎn)子,確保質(zhì)量重心平衡,防離心機(jī)震動。

  2. 離心參數(shù)


    根據(jù)規(guī)格調(diào)整轉(zhuǎn)速(5000 - 12000×g),離心15 - 40分鐘,如10kDa截留量超濾管常用12000×g離心30分鐘。調(diào)低加速度,減少對膜沖擊。離心機(jī)預(yù)冷至4℃,防蛋白變性。離心后檢查管底有無蛋白沉淀,有則分析調(diào)整。

三、樣本收集與后續(xù)

  1. 回收濃縮液:用移液槍輕柔吸取或倒置離心回收,避免觸碰膜面。

  2. 置換緩沖液:濃縮至1mL后加新緩沖液,重復(fù)3次。

  3. 清洗保存:一次性超濾管用后丟棄;可重復(fù)使用的經(jīng)純水、乙醇清洗消毒,短期用75%乙醇浸泡,長期用20%乙醇保存。

超濾離心管的正確使用方法

四、注意事項(xiàng)

控制離心力、正確放置方向防膜破損;預(yù)留足夠樣本量防損失;冰上操作、消毒防污染。



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